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永利yl8886官方网站之免疫T细胞完全无血清、规模化放大培养用培养基
前 言
2021年6月22日，中国国家药监局公示，复星凯特CAR-T细胞治疗产品阿基仑赛注射液(奕凯达®，代号：FKC876）正式获得批准。8月17日，中国国家药监局药品审评中心（CDE）公示，由复星凯特申报的阿基仑赛注射液被纳入突破性治疗药物程序，拟用于治疗接受过二线或以上系统治疗后复发或难治性惰性非霍奇金淋巴瘤。复星凯特CAR-T细胞治疗产品是中国首个获得国家药品监督管理局批准上市的嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞药品，开启了中国肿瘤细胞治疗新未来。
我国对免疫细胞治疗产品实行双轨制监管。在药品化监管方向，2017年12月22日，原国家食药总局发布《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）》，其指出：“细胞治疗产品可按照药品管理相关法规进行研发和注册申报”，并在药学研究、非临床研究、临床研究等方面进行了细化的规范指导，该法规标志着我国正式开启细胞治疗产品的注册上市流程。此后，又相继出台了一系列法规，对细胞治疗的药品管理法规进行进一步完善，基本实现细胞治疗产品从医疗技术向药品的转化，奠定了细胞治疗药品化的基础。目前，据不完全统计，国内有近70款免疫细胞治疗技术IND申报获得受理，被批准临床实验，截至目前国内所有获批项目均为基于T细胞的免疫细胞治疗产品，其中CAR-T药物有62个。在适应症方向绝大多数针对血液系统肿瘤，CAR-T靶点方面，大部分为CD19 ，其次是BCMA及GPC3、Claudin18.2等。
细胞治疗产品药品化生产标志着细胞产品生产方式的巨大转变，细胞产品的生产与质量控制体系需要根据GMP药品法规进行改革，针对生产过程中的关键因素，人、机、物、法、料、环的管控以及各个制备生产阶段，都需要按照GMP法规进行适应性变化。因此，细胞治疗产品药品化生产是对细胞治疗产品的系统性挑战，是细胞生产作业方式的全面、系统、规范化的升级改革。如何确保法规符合性，满足作为药品的严格质量控制与安全性评价并同时符合成本控制及规模化生产要求是每个细胞治疗机构面临的共同问题，更关乎如何在众多的竞争对手中脱颖而出，顺利通过研发、IND申报、临床试验，并最终上市。
一、制备工艺与关键试剂
在制备工艺及关键物料上，对于工艺过程所用试剂各相关法规做了严格一致的要求。2020年9月30日，国家药品监督管理局药品审评中心发布了《免疫细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则（征求意见稿）》，指出：
“尽量避免使用具有潜在致敏性的材料，如某些动物血清、特定蛋白质、血型物质、β-内酰胺类抗生素（如青霉素）等。尽量避免使用动物源性材料，尽可能用规定组成成分的非动物源性试剂替代。如果必须使用动物来源原材料，需要提供相关的研究资料说明使用的必要性和合理性，并针对原材料的物种来源、生产地区、生产工艺建立完整的质控体系，评估 TSE/BSE 安全性风险，并对终产品中的动物源材料残留量进行检测及开展安全性风险评估。严禁使用疫病流行区来源的动物血清，不得使用未经过安全性验证的血清。如生产过程使用自体血清或自体血浆，应说明血清/血浆的生产工艺，并对包装、存放条件和时间等进行研究。如果使用同种异体血清，其使用的原则与安全性风险控制要求参考上述动物来源原材料的要求，使用中重点关注人源外源因子的风险监控和不同来源、不同批次血清质量差异可能对产品生产过程产生的影响。人源性材料（如白蛋白、免疫球蛋白等）可以参考血液制品的质量要求和检测方法”。
毋庸置疑，培养基是很关键的试剂。为了保证产品的安全性及质量品质，需求的不仅仅是无血清培养基，而是无血清、无人/动物源性的培养基，并满足规模化放大培养要求。
二、MCMCulLymT-SFM10--T淋巴细胞无血清培养基
图1 T淋巴细胞无血清培养基
MCMCulLymT-SFM10（图1)是永利yl8886官方网站生物试剂隆重推出的，专用于人T淋巴细胞悬浮扩大培养的无血清培养基，技术配方优越，其化学成分明确，不含动物及人源性蛋白成分，蛋白含量低。可广泛适用于各种培养工艺(静置培养，生物反应器下的流加及灌流模式培养等)下的T细胞(CAR-T及TCR-T等)体外个性化/规模化无血清悬浮扩增培养。
T淋巴细胞无血清培养基产品优势
● 成分明确，不含动物及人源性蛋白成分，蛋白含量低，安全性高；
● 完全支持无血清培养，不需添加血清或血清替代物，适应于生物反应器放大培养。
● 扩增能力强，支持T淋巴细胞体外高倍快速增殖；
● 支持T细胞体外长期扩增，可达21天以上；
● 培养工艺适应性好，经过多种不同培养体系验证，如培养瓶/袋静置培养及一次性生物反应器下流加及灌流培养模式等，配套有培养工艺技术支持；
● cGMP标准生产，采用一次性生产技术工艺，产品品质可靠，性能稳定，一致性高。
三、MCMCulLymT-SFM10应用于T细胞扩增培养效果展示
3.1 MCMCulLymT-SFM10与进口T淋巴细胞无血清培养基静置培养对比
3.1.1 MCMCulLymT-SFM10完全无血清培养（不添加血清/血清替代物）（图2)
图2 MCMCulLymT-SFM10完全无血清培养效果
（不添加血清/血清替代物）
3.1.2 MCMCulLymT-SFM10+5%CT培养（图3)
图3 MCMCulLymT-SFM10+5%CT培养效果
3.1.3 MCMCulLymT-SFM10+5%FBS培养（图4)
图4 MCMCulLymT-SFM10+5%FBS培养效果
3.1.4 综合对比
综合对比如（图5-图8)
图5 不同培养体系T细胞培养效果--VCD
图6 不同培养体系T细胞培养效果--活性
图7 不同培养体系T细胞培养效果--扩增倍数
图8 不同培养体系T细胞培养效果--平均二倍时间
3.2 MCMCulLymT-SFM10静置培养评价：
MCMCulLymT-SFM10适应于完全无血清培养，不需要添加任何血清或者血清替代物，对比进口培养基A，细胞活性及扩增速度均有优势。
MCMCulLymT-SFM10完全无血清培养效果优于进口培养基A及进口培养基A+5%CT/FBS的培养效果。当添加5%血替CT或FBS时，可进一步提高MCMCulLymT-SFM10的培养效果。
MCMCulLymT-SFM10不需要配合血清替代物及血清，单独使用即可高效进行T细胞扩增培养，真正意义上实现T细胞体外无血清高效扩增培养，有利于节省成本、提高效率及产品安全性。
四、MCMCulLymT-SFM10应用于T淋巴细胞规模化培养
4.1 MCMCulLymT-SFM10在10L生物反应器规模化放大培养效果如（图9-图11)
图9 MCMCulLymT-SFM10在CES-10L规模化培养效果1
图10 MCMCulLymT-SFM10在在CES-10L规模化培养效果2
图11 MCMCulLymT-SFM10在CES-10L规模化培养效果3
4.2 MCMCulLymT-SFM10在25L生物反应器规模化放大培养如（图12-图14)
注：实验所使用细胞在接种时，前期已经培养17天。
图12 MCMCulLymT-SFM10在CES-25L规模化培养效果1
图13 MCMCulLymT-SFM10在CES-25L规模化培养效果2
图14 MCMCulLymT-SFM10在CES-25L规模化培养效果3
4.3 MCMCulLymT-SFM10生物反应器规模化放大培养评价：
MCMCulLymT-SFM10无血清培养基支持生物反应器条件下T细胞完全无血清培养，可适应于不同放大体系规模（10L,25L），是T细胞规模化放大培养的可靠选择，可有效提高细胞品质及安全性。特别针对一次性培养体系，可解决因添加血清或血清替代物可能导致引起絮状物产生进而对细胞产生不利影响的问题。
五、MCMCulLymT-SFM10无血清培养基
MCMCulLymT-SFM10无血清培养基其化学成分明确，不含动物及人源性蛋白成分，蛋白含量低。可广泛适用于各种培养工艺(静置培养，生物反应器下的流加及灌流模式培养等)下的T细胞(CAR-T及TCR-T等)体外个性化/规模化无血清悬浮扩增培养。
在培养过程中，支持完全无血清培养，不需要添加血清及血清替代物。完全无血清培养体系符合法规对细胞培养过程的安全性及质量品质要求，有效解决培养过程因引入外源物质导致的安全性及稳定性风险，是免疫T细胞扩增培养的可靠选择。
参考文献
[1]中国国家药监局药品审评中心（CDE）.Retrieved Aug 9，2021
[2]《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）》2017年12月
[3]《免疫细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则（征求意见稿）》2020年9月
注：
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